灭活病毒保存液是如何裂解病毒的

灭活病毒保存液是如何裂解病毒的

有些地方核酸检测比较多,直接把这种灭活型病毒保存液称为核酸释放剂,它最根本的特点是快速灭活病毒,将病毒蛋白膜衣壳降解掉,同时将病毒核酸(新冠是RNA病毒)释放出来,这样可以进行逆转录后PCR扩增实验,达到利用核酸检测病毒的目的。

裂解病毒的方式有很多种:比如加热法和浓盐法

加热法是需要加热80到100摄氏度加热5~10分钟,操作很简单,只用一步即可得到用于核酸PCR扩增的模板,不需要任何离心、抽提等操作步骤,比常用的CheleX100提取方法和苯酚/氯仿方法快。这种方法虽然简单快速,但是提取的核酸含量较少。

而浓盐法是高浓度的盐可以破坏核酸与蛋白质之间的次级键,使核蛋白解联,使病毒核酸释放出来。通常使用盐酸胍、异硫氰酸胍或非胍盐裂解盐,可以直接裂解灭活病毒,不需要加热处理样本,简便快速。

灭活型病毒保存液中除了含有裂解的成分,通常还含有使蛋白变性破坏膜结构的去污剂、生物缓冲剂还有防止核酸酶降解核酸的抑制剂,以及维持核酸结构稳定的试剂等。裂解体系还可能加入蛋白酶,将蛋白质切成小片段,促进蛋白质与核酸的分离。

华晨阳科技为了满足不同的检测需求,不仅有灭活型的病毒保存液也有非灭活型的保存液, 在国内外深受好评。

灭活病毒的保存液试剂具有什么优势?

灭活病毒的保存液试剂具有什么优势?

灭活病毒的保存液试剂通常指灭活型病毒保存液,与非灭活保存液不同,它不需要保留病毒的活性,可以在迅速杀灭病菌的同时又不会对后续的病毒核酸检测造成影响。

灭活型病毒保存液因为是用于高效灭活病毒的,在采样与检测处理环节都比非灭活型保存液安全性高,不会造成二次感染,所以操作要求和实验环境要求都稍微低一些。对于快速核酸检测的效率与核酸检测覆盖率来说更有优势。

这种类型的病毒保存液之所以能快速灭活病毒是因为液体中含有高浓度的裂解盐。常用的胍盐有盐酸胍、异硫氰酸胍等,这种成分在浓度较高的时候可以迅速将病毒的蛋白质外壳变性裂解,让保存液中的病毒核酸被释放出来,然后通过核酸检测就可以判断是否感染病毒。

也有一种不含胍盐的灭活型保存液,而是用其他的裂解盐,作用是与胍盐是类似的,都是裂解病毒蛋白。还有一些不含胍盐的保存液能在灭活病毒的同时既保护病毒RNA也保留蛋白活性,这种除了用于核酸检测也能用于lgM、lgG抗体检测、抗原检测。

病毒在被病毒保存液灭活后还能被检测出来是因为每一种细胞或生物具有特定的核酸序列,通过DNA的扩增和测序就可以确定是否是病毒特定的核酸序列。RNA病毒的核酸需要经过逆转录转换成DNA再进行测序。

病毒采样管UTM、MTM、和VTM都有什么区别?

病毒保存液或者是样本保存液是采样管中添加的一种液体介质,我们在采样管标签中看经常会看到三种类型:UTM、VTM和MTM,那这几种保存液都有什么区别呢?

之所以出现三种名称有部分原因是因为不同地区使用习惯不同以及翻译问题造成的,甚至还有其他名称,当然他们的保存液成分有些也有一定的差别。

病毒采样管有哪些方面的要求

在国内一般用的比较多的是VTM,即viral transport  medium或者virus transport medium直译是病毒运输介质的意思,分为两种,灭活型标记为Inactivated,非灭活型标记为activated。

在国外部分地区,VTM和UTM都是指病毒保存液,UTM全称universal transport media,直译为通用运输介质,在病毒采样管中就是指的病毒保存液。这里的VTM和UTM通常都是指非灭活型保存液。有些厂家,VTM比UTM更有针对性,专门针对病毒样本的保存运输。

还有一种称为MTM,全称molecular transport media,直译为分子转运介质,对于新冠病毒样本检测这里的分子就是指的核酸RNA。MTM即是指灭活型病毒保存液,适用于传染病样本收集、储存和运输,是专门微客服标准病毒运输介质(VTM)和通用运输介质(UTM)(这些不会使微生物失活,也可能能抑制分子测试)的缺点而开发的。

病毒采样管都有什么优势?

MTM是专门设计来安全地灭活病原样品,同时保存和稳定释放的DNA和RNA。MTM中的裂解盐(盐酸胍、硫氰酸胍或其他)可以破坏病毒的保护性蛋白质外壳(衣壳),使病毒无法再感染,但同时保留了病毒核酸,即可用于分子诊断、测序和核酸检测。(有一些公司的灭活型也会标成UTM或者是VTM)

非灭活型病毒采样管虽不能灭活病毒,但它因为保存了病毒完整性状,除了用于核酸检测还能用于病毒表面抗原或抗体检测。其实病毒保存液的灭活型和非灭活型并没有说哪一种更好,华晨阳科技根据不同厂家产品以及检测环境的要求,灭活型和非灭活型量种保存液都可以提供。

病毒保存液除了RNA型外还有DNA型吗?

病毒保存液除了RNA型外还有DNA型吗?

我们的病毒保存液通常分为两种类型,灭活型和非灭活型,不过这两者类型目前都是针对RNA病毒的,这主要是因为当今疫情下的冠状病毒都属于RNA病毒。病毒实际上是由DNA病毒和RNA病毒的,那么病毒保存液能适用于DNA病毒吗?

答案是不能直接用于DNA病毒的采样,经过调整则可以适用。不管是哪种类型的病毒保存液,最终目的都是保护病毒核酸在体外不会迅速降解,便于特定核酸序列扩增达到检测的目的。所以将RNA型病毒保存液中的Rnase酶抑制剂换成Dnase酶抑制剂即可,这样就能保证病毒DNA不会降解,从而达到检测的目的。

DNA和RNA都是控制一切生命活动的遗传物质,统称核酸,RNA病毒有着远超DNA病毒的突变型,在遗传表达上,DNA与RNA又扮演着怎样的角色呢?

DNA转录RNA,RNA翻译蛋白质

细胞间期,染色体不再受到纺锤体的牵引作用,开始松散,逐步去螺旋。这是DNA逐渐开始与外界接触,当接触到与其碱基序列配对的RNA时就会与之配对,这就是转录过程。RNA转录完成后,就会和hnRNP一起穿过核孔到细胞质中去。然后RNA会遇到核糖体,并开始翻译合成蛋白质。

DNA和RNA的归宿

内切酶将DNA从染色体上剪切下来,带上鸟苷酸的帽子离开细胞核到细胞液中,通过解旋酶由双链变成单链,通过DNA糖苷酸切除核苷酸T,再通过AP核酸内切酶(剪切掉DNA5’端脱嘌呤和脱嘧啶位点的蛋白质酶)、DNA聚合酶、连接酶进行短修复,这样的单链便有了RNA才有的核苷酸U,最终遇到DNase便被逐步水解。RNA则是脱离多聚核糖体后,利用在核糖体中翻译出的RNase直接把自己水解掉。DNA和RNA水解后的核苷酸都会进入细胞核开始下一个核酸合成过程。

其实DNA和RNA都是产生生命奇迹的基础物质,两者各司其职又非常相似,都参与生命遗传信息的表达,只拥有蛋白质和核酸结构的病毒也只是核酸不同,所以对应的病毒保存液也是非常相似的,区别只是抑制核酸水解的酶不一样。

使用病毒采样管时该注意那些事项?

测核酸的病毒保存液洒手上了该怎么办?

病毒保存液是采样管中保存病毒样本的溶液,通常是在特定的实验室中使用的。最近有客户问我们测核酸检测的病毒保存液洒手上了要怎么办,让人哭笑不得的同时也给我们敲了个警钟。

不过值得庆幸的是,病毒保存液洒在手上基本是采样前的保存液,是不含病毒样本的。因为如果是对已采集的病毒样本的保存液操作时,是需要在专门的实验室有专门的技术人员操作的,由于提前穿好了防护服防护手套护目镜等装备,是不会让保存液接触到皮肤的。

但是在病毒保存液的分装、灌装、化验等过程中,有些单位是不需要穿戴全套防护装备的,的确是有可能接触到皮肤。这种情况下保存液中并不含病毒样本,其实也不必过于担心。不过病毒保存液毕竟不是一般的水溶液,还是需要在使用时多加注意的。

病毒保存液接触皮肤是否会造成影响取决于保存液中的成分。例如灭活型病毒保存液中主要是高浓度的裂解盐(如盐酸胍等)、EDTA、Tris缓冲液、RNase抑制剂;灭活型主要含有Hank’s液基础、抗生素、BSA(V)、HEPES缓冲剂等。这些成分直接接触皮肤立即用清水冲干净,然后用洗手液洗净即可,并不会造成中毒的。

这段时间由于病毒采样管、样品保存液、采样鼻咽拭子等产品贸易量比较大,仓库货中转过程可能会出现意外,造成保存液漏液的问题。虽然说这是并不含有毒性的液体,但是华晨阳科技还是再次提醒大家,在进行搬运、分装,采样等操作时一定要小心,戴好手套、护目镜等防护用具。

 

 

 

使用病毒采样管时该注意那些事项?

病毒采样管用于样本采样的方法

一次性病毒采样管主要用于病毒样本的收集、运输和储存。主要装有拭子和病毒保存液的采样管构成。关于采样管的保存也是有要求的,比如,禁止强光下使用等。

一次性病毒采样管适用于流感病毒和其他病毒,也用于支原体、衣原体、解脲等离子体等。使用一次性病毒采样管对感性感染的患者通常可以考虑使用植绒拭子(比较舒服,比较柔软,患者体验度高)

一次性病毒采样管主要用于鼻咽拭子样品或特定结构样品从采样点送到测试实验室,进行PCR提取和检查。适用于呼吸系统病原体的诊断

使用方法:

根据《新冠肺炎患者标本采集技术专家共识》,鼻拭子和咽拭子标本的采集具体方法如下:

鼻咽拭子采集:

①、患者向后倾斜(约70°)不动;

②、用拭子推算从耳根到鼻孔的距离;

③、从鼻孔的垂直面部方向插入,深度距离至少要达到从耳垂部到鼻尖的长度的一半。抵抗后必须后马上到达鼻咽,停留几秒钟吸入分泌物(一般要求15~30s),使拭子旋转3~5次

④、最好轻轻旋转拭子取出,把拭子头部放进装有细胞保存液的病毒采样管中;

⑤、前端折断无菌拭子杆,扔掉尾部,拧紧管盖用封口膜封闭。

口咽拭子采集:

①、指示患者坐下,头后仰,张大嘴,并发出“啊~”的声音;

②、将拭子从纸塑袋里小心拿出;

③、用压舌板固定舌头,越过舌根擦拭咽后壁和扁桃体的隐窝、侧壁等;

④、首先用拭子适度强力往返两侧咽扁桃体至少擦拭3次,然后擦拭咽后壁至少3次、3~5次。

⑤、取出拭子、不要接触到舌头、悬锤体、口腔黏膜、唾液等

⑥、把拭子头放进含有病毒保存液的采样管里,将拭子靠在管子上,按着折断点压折拭子尾部。

⑦、拧紧管盖,并丢弃折断的拭子尾部,将采样管放进生物安全袋里,及时送检。

目前,华晨阳科技有大量的一次性采样拭子、唾液采集器、病毒采样管、鼻口咽拭子等一次性使用核酸检测器材,欢迎大家前来订购,华晨阳科技热线:0755-27393226